产品基本信息

　　细胞名称：TMD8人弥漫性大B淋巴瘤细胞

　　种属来源：人

　　组织来源：B细胞

　　细胞形态：淋巴母细胞样

　　生长特性：悬浮生长培养体系DMEM高糖+10%FBS+1%双抗

　　培养温度37℃二氧化碳浓度5%

　　简介人弥漫大B淋巴瘤细胞TMD8取自62岁男性供体。

　　支原体检测：无

　　TMD8人弥漫性大B淋巴瘤细胞培养操作

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4mL培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心3min，弃去上清液，加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　b、加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　c、按6-8mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000rpm离心4min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

　　a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加1mL血清重悬细胞，进行细胞计数。

　　b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

　　c、将冻存管放入-80℃冰箱，24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取

　　TMD8(人弥漫大B淋巴瘤)接收后的操作流程与注意事项

　　1.细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。

　　2.如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。

　　3.贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。

　　4.生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。