小鼠骨形成蛋白1(BMP1) elisa试剂盒夹心法操作步骤:实验开始前,各试剂盒样本均应平衡至室温;样本复融后需再次离心,取上清检测;试剂或样本配制时需充分混匀并尽量避免起泡;标曲和样本建议做复孔检测。简单操作步骤如下:【加样】、【加生物素化抗体/抗原】、【洗涤】、【加HRP酶结合物】、【加底物溶液】、【加终止液】、【读值】。实验完毕猴将未使用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。小鼠骨形成蛋白1(BMP1) elisa试剂盒操作流程如下:
1.【平衡试剂盒至常温】:取出实验过程中所需板条,剩余半条用自封袋密封放回4摄氏度。
2.【加样】:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。在样本孔先加样本10μl再加样本稀释液40μl,(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
3.【加酶】:标准品孔和样本孔总每孔加入酶标试剂100μl(辣根过氧化物酶标记的检测抗体)空白孔除外。
4.【温育】:用封板膜封住反应孔,37℃恒温箱温育60分钟。
5.【配液】:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.【洗涤】:小心揭掉封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置60秒后甩去洗涤液,吸水纸上拍干。如此重复5次(也可用洗板机洗板)。
7.【显色】:每孔先加入底物溶液A 50μl,再加入底物溶液B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光孵育15分钟。
8. 【终止】:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9. 【测定】:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。