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蛋白质Edman测序N端测序技术
2023-12-20 07:20  浏览:17
蛋白质Edman测序N端测序技术

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关键词:N端测序,Edman测序,蛋白质n端,蛋白质组学,代谢组学,tmt,抗体测序,itraq,蛋白质谱鉴定,蛋白质组学,代谢组学,tmt,抗体测序,itraq,蛋白质谱鉴定

蛋白质表达起始于N端,蛋白质N端序列对于蛋白的功能、蛋白稳定性、以及在细胞中的定位都有着重要作用,因此蛋白质N端序列分析能为蛋白质功能、定位等研究提供重要依据。

测序原理

I、Edman降解测序法

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蛋白质Edman测序流程

Edman测序循环包括3步:

1-. 在碱性条件下,PITC与蛋白N端的游离氨基结合

2. 在酸性溶液中,N端残基被切除

3. PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间不同,从而确定氨基酸种类。

II、质谱测序法

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蛋白质质谱测序流程

质谱测序原理是将蛋白质经胰蛋白酶酶切后,直接用串联质谱测定酶切肽段混合物,然后通过一级质谱选择N端肽段离子进行串联质谱分析而得到N端序列。能够对混合蛋白、末端封闭或糖基化的蛋白质进行测序。

测序平台

SHIMADZU PPSQ-33A测序仪

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SHIMADZU PPSQ-33A测序仪

平台优势

• 高灵敏度检测PTH-氨基酸

• UV-VIS探测器SPD-20A

• 稳定分析微量样品

• 准确区分分子量相近的氨基酸(I/L、Q/K)

Obitrap Fusion Lumos质谱仪

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Obitrap Fusion Lumos质谱仪

平台优势

• 分辨率高达 500,000 FWHM

• 高容量离子传输管

• 超低检测限的电动离子漏斗

• 高清ETD,显著增加碎片离子覆盖率

测序亮点

• 可测定多种形式的样品:蛋白溶液、PVDF蛋白条带

• 仅需1-10 ug蛋白样品即可完成检测

• 可测定蛋白N端多达70个氨基酸序列

• 全自动序列分析,序列分析更准确

• 测序不受N端封闭,PEG和糖基化等N端修饰的影响


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