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柱层析硅胶使用方法
2025-06-05 09:06  浏览:0
柱层析硅胶使用方法

柱层析是一种常用的分离纯化技术,硅胶是其中重要的载体材料。

 

一、硅胶的选择

根据目标化合物的性质选择合适的硅胶。常见的有不同粒径的硅胶,粒径越小,分离效果越好,但流速会变慢。一般粗分离可选用粒径较大的硅胶,如60 - 120目;精细分离可选用200 - 300目硅胶,常用粒径60-100目 80-120目 100-200目 160-200目 200-300目 300-400目等。

 

二、装柱

柱子准备:选择合适内径和高度的玻璃柱,清洗干净并烘干。

硅胶处理:将硅胶与适量洗脱剂混合,搅拌均匀,使硅胶充分润湿。(常用湿法装柱,也可干法装柱)

装柱:将润湿的硅胶倒入柱子中,轻轻敲击柱子,使硅胶均匀分布,避免出现气泡。装柱过程中要保持柱子垂直,硅胶层表面平整。

三、样品加载

将待分离的样品溶解在少量洗脱剂中,用滴管小心地将样品溶液加在硅胶柱表面,避免破坏硅胶层。样品溶液的体积一般不超过硅胶柱床体积的1/10。

 

四、洗脱

洗脱剂选择:根据目标化合物的极性选择合适的洗脱剂。极性小的化合物可选用正己烷、石油醚等非极性溶剂;极性大的化合物可选用乙酸乙酯、甲醇等极性溶剂。

洗脱操作:打开柱子下端的活塞,让洗脱剂缓慢流过硅胶柱,收集流出液。根据目标化合物的洗脱位置,分段收集流出液。

五、检测与收集

检测:用薄层色谱(TLC)或其他检测方法跟踪目标化合物的洗脱情况。当检测到目标化合物流出时,开始收集目标组分。

收集:将含有目标化合物的流出液合并,去除溶剂,得到纯化后的目标化合物。

使用柱层析硅胶时,要注意操作规范,避免硅胶层被破坏,影响分离效果。根据具体实验需求,灵活调整实验参数,以达到**的分离纯化效果。

 


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