飞凡检测提供细胞纯度检测,细胞表面标志物检测,细胞因子生物活性检测,细胞形态检测,细胞基因突变检测,细胞遗传检测,细胞装量检测。
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检测干细胞制剂进行纯度和均一性;特别是对胚胎干细胞及iPS细胞植入人体前的终末诱导分化产物,纯度和均一性。
CAR-T 细胞质量检测概述-飞凡检测中心
CAR-T 细胞回输到患者体内前需经过严格的放行检测。
CAR-T 细胞的质量检测主要包括生化检测、微生物检测和细胞学检测。
生化检测主要用于 CAR-T 的鉴别和纯度检测;细胞学检测主要是细胞计数、活率检测、体外效价检测(ELISA 检测试剂盒)等;微生物检测主要进行总厌氧菌计数、酵母和霉菌检测等。
CAR-T 细胞质量的优劣直接影响临床治疗效果和患者的健康,如不进行严格检测,甚至会危及患者的生命。
CAR-T 的效价检测可以用细胞因子 ELISA 检测试剂盒来实现,通过检测代表性细胞因子的表达来评估 CAR-T 细胞对靶细胞的杀伤活性和特异性。
CAR 表达水平可以通过流式细胞术检测 CAR 阳性 T 细胞的百分比来评估。
CAR-T 细胞质量检测之流式抗体-飞凡检测中心
流式细胞术作为一种在功能水平上对单细胞进行定量分析和分选的检测手段,可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好等诸多优势,是判断 CAR-T 细胞活性和组分的一种重要方式。
如全球首个获得 FDA 批准上市的 Kymriah 作为一款基于基因改造的靶向 CD19 的自体 T 细胞免疫疗法,在其治疗过程中,常通过流式细胞术检测 CD19 CAR 的表达来评估基因编辑同种异体 CD19 CAR-T 细胞的制备成功率。
利用 CD19 CAR 能特异性结合 CD19 蛋白的特性,如果待检 T 细胞正常表达了 CD19 CAR,生物素标记的 CD19-Fc 蛋白就能被标记到待检 T 细胞表面;利用生物素能特异性结合亲和素(Streptavidin-PE)和 Anti-CD3-BV711 抗体能特异性结合 CD3 分子的特性,如果待检 T 细胞表面有生物素和 CD3 分子,链霉亲和素上的 PE 和 Anti-CD3 抗体上的 BV711 荧光标记就能被标记到待检 T 细胞表面;将制备好的单细胞悬液上机进行流式细胞分析。
检测结果显示,CD3 阴性 T 细胞群中 CD19 CAR 表达的比例要高于 CD3 阳性 T 细胞群。