| 货期 : | 现货 | 运输 : | 4度避光 |
| 分类 : | 生物碱 | CAS : | 298-93-1 |
| 产品规格 : | 1克 | 含量 : | 98％ |
| 级别 : | 色谱纯 |
货号：CT-MTT-1
包装量：1.0克MTT粉末
价格：288元
储存：+4°C，避光
MTT全称为3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide，汉语化学名为 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。
在水中的溶解度为20 mM。
技术资料：
CAS No：298-93-1
分子量：414.32
分子式：C18H16N5SBr
纯度：>98%
MTT主要有两个用途：
1．药物（或其他处理方式）对体外培养的细胞活性的测定；
2．细胞增殖及细胞活性测定。
MTT实验的原理：
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢（Formazan），并沉积在细胞中，而死细胞不能进行这个反应。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臢，用酶标仪在570 nm波长处(490 nm-570 nm之间都可以）测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
根据测得的吸光度值（OD值）来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的药物筛选、细胞活性试验以及肿瘤敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济实惠。
MTT实验方法（供参考）
一、MTT的配制
通常配制的MTT浓度为5 mg/ml。
可以称取MTT0.5克，溶于100ml的磷酸盐缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存，两周内用完。
也可分装后避光保存在-20℃长期保存，并避免反复冻融。
在配制和保存的过程中，容器用铝箔纸包住。
二、实验步骤
A、贴壁细胞
1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，向96孔板每孔加入100ul铺板，调节待测细胞密度使每孔含1000-10000个细胞，边缘孔用无菌水或PBS填充。
2、在5%CO2，37℃条件下孵育。
原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，或过夜。
一般常在前一天下午铺板，次日上午加药。
一般设5-7个药物梯度，每孔100ul，一般设3个复孔即可，复孔越多结果越准确。
同时设置调零孔（仅含培养基和药物溶解介质）和对照孔（仅含细胞和药物溶解介质）。
3、置于5%CO2，37℃条件下，孵育时间根据药物的作用特点来决定，一般24-72小时，中途可在倒置显微镜下观察细胞状况。
4、每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），37℃继续培养3-4小时。
若药物能够与MTT反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS洗2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5、终止培养，小心吸去孔内培养液。
6、每孔加入150 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10分钟，使结晶物充分溶解。
在570nm（可用630nm校准）测量各孔的吸光值。
B、悬浮细胞
1、收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1E6/ml，依次将①细胞悬液50ul（即5E4cell/孔），②待检测药物50ul，共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充）。
一般设5-7个药物梯度，一般设3个复孔即可，复孔越多结果越准确。
同时设置调零孔（仅含培养基和药物溶解介质）和对照孔（仅含细胞和药物溶解介质）。
2、置于5% CO2，37 ℃条件下，孵育时间根据药物的作用特点来决定，一般24-72小时，中途可在倒置显微镜下观察细胞状况。
3、每孔加入10 ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），37℃继续培养3-4 h。
4、离心（1000转x10 min），小心吸掉上清，每孔加入150μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
在570nm（可用630 nm校准）测量各孔的吸光值。
注意事项
1、MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞数。
在用酶标仪检测结果的时候，为保证实验结果的准确，MTT 吸光值要控制在仪器的线性读取范围内。
2、MTT现用现配，配制成5mg/ml无菌过滤后，在4 ℃避光保存两周内有效，或在-20℃长期保存，避免反复冻融，小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光，以免分解。
3、保存的MTT溶液需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，不放心的话可以把操作台上的照明灯关掉。
4、配制MTT时用PBS溶解,也有人用生理盐水配，可用60℃水浴助溶。
5、MTT的缺点：由于MTT经还原所产生的甲臢产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲臢的有机溶剂对实验者也有损害。
6、MTT有致癌性，用的时候小心，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，戴透明的薄膜PE手套。
7、本产品于专业人员的科学研究使用。