Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型,将前者与Gal4的BD结构域融合,另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合,由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”(bait)和“猎物”或靶蛋白(prey or target protein)。
石蜡切片的FISH要点
(1)组织固定,采用PH7.2的10%甲醛固定24h是比较适合的,PH很重要。较厚的组织块建议切开后再固定。这一点小编已经反复提过很多次了。良好的固定是所有病理实验的前提。
(2)对于石蜡切片来说,采用蛋白酶K作为消化液是更优的选择。消化条件20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min。胃蛋白酶是极易失活的,失活了就没法充分消化,ISH服务,消化过度又会使细胞核变模糊。综合来看,小编更推荐蛋白酶K。
(3)石蜡切片的杂交温度一般都是37摄氏度。而杂交时间则需要摸索才能得到更佳时间。不过,一般的过夜孵育基本可以达到目的。
(4)FISH实验中非特异性着色是个难以避免的问题,我们能做的就是尽量减少背景。具体可作为的地方:充分严格漂洗、全程避免干片、探针浓度不宜太高、杂交温度要控制在37℃。
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客户提供:
1、FAA固定液固定的样品。取材要求:固定液预冷,取材冰上操作。材料大小8 mm×5 mm×3 mm左右。取材后抽真空5~20 min。该步骤重复至材料沉入玻璃瓶底部, 使样品充分固定后,4 ℃过夜。
2、需要研究的基因信息。
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