荧光显微镜的原理
荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜,其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发,使之产生一定波长的荧光,从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。
荧光显微镜是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,然后观察。
荧光显微镜广泛应用于生物,医学等领域。
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荧光显微镜的标本制作要求
1、载玻片
载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,太厚的坡片, 一方面光吸收多,另一方面不能使激发光在标本上聚集。
载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自发荧光。
有时需用石英玻璃载玻片。
2、盖玻片
盖玻片厚度在0.17mm左右,光洁。
为了加强激发光 ,也可用干涉盖玻片,这是一种表面镀有若干层对不同波长的光起到不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片,它可以使荧光顺利通过,而反射激发光,三目正置荧光显微镜,这种反射的激发光可激发标本。
3、标本
组织切片或其他标本不能太厚,若太厚激发光大部分消耗在标本下部,而物镜直接观察到的上部不充分激发。
另外,细胞重叠或杂质掩盖,影响判断。
4、封裱剂
封裱剂常用甘油,必须无自发荧光,无色透明,荧光的亮度在pH8.5~9.5时较亮,不易很快褪去 。
5、镜油
一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时,必须使用镜油,尽量使用无荧光镜油,也可用上述甘油代替,液体石蜡也可用,只是折光率较低,对图像质量略有影响。
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使用荧光显微镜的注意事项
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(1)严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序。
(2)应在暗室中进行检查。
进入暗室后,接上电源,点燃超高压灯5~15min,三目正置荧光显微镜公司,待光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗室,再开始观察标本。
(3)防止紫外线给眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。
(4)检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱;所以,不得超过2~3h。
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