这种方法可以被应用于的生物标记检测中,并可以广泛应用到医学诊断中各种生物标记物的定量检测,以及食品安全和环境检测中。(Y. Zhao, D. Du, Y. Lin, Glucose encapsulating liome for signal amplification for quantitative detection of biomarkers with glucometer readout, Biosensors and Bioelectronics,羧基磁性微球, 2015,沧州磁性微球, 72: 348-354.) 磁性微球如何与蛋白偶联? 当微球带有—OH、—NH2、—COOH等功能基团时,可进行的共价或者非共价偶联,可用于结合相应的抗原或从而形成磁珠,即蛋白偶联过程,可采用EDC/HNS偶联的方法。 将100mg磁性微球分散于2mL磷酸盐缓冲液(PBS缓冲盐10mmol/L,PH7.4)中,加入50mgEDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-碳),25mgNHS(N-羟基琥珀酰)和适量BSA(以此为例),室温振荡反应2h。磁分离,保留上清,磁性微球用PBS洗涤3次即可。
结合缓冲液一般采用醇类结合,比如乙醇,有些厂家缓冲液是直接使用柱法的试剂转换成磁珠法的,会发现在柱法中表现很好的试剂,在磁珠法中得率很低。这是因为柱法不但其硅胶柱具备结合核酸的能力,还有类似「分子筛」的效果。而磁珠法一般是通过静电吸附、疏水作用来结合核酸,所以对于结合液的结合能力要求会更高,一般可以通过提高醇的比例来增强结合能力,同时,也要提高离液盐(胍盐、钠盐等)的浓度来促进核酸与磁珠的结合。
磁性纳米粒子与多种高分子具有良好的生物兼容性。 磁性纳米粒子的表面修饰包括:非聚合物有机固定、聚合物有机固定、无机分子固定、靶向配套修饰等。常用来作为修饰的物质有聚乙二醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、脂肪酸、聚乙烯乙醇、多肽、明胶、壳聚糖、、脂质体等。磁性纳米粒子的表面修饰主要有2种途径:一是表面修饰材料与粒子表面依靠化学键结合,这通常是指一些有机小分子化合物;二是用有机或无机材料直接包裹磁性纳米粒子,主要包括表面活性剂、高分子聚合物、和二氧化硅等。表面修饰不仅增强了磁性纳米粒子的稳定性,还能提高其在水溶液中的分散性和生物相容性,提高靶向性,防止蛋白吸附,磁性高分子微球,增加其在血液循环中的时间,以及进一步复合其它的纳米粒子、化合物或生物配体,实现磁性纳米粒子的功能化。
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