下面的步骤是PCR的反应原理,同时也是PCR仪的工作原理。
简单的说,就是通过高温变性,退火复性,pcr检测仪,延伸三个部分。
双链DNA在一定的环境中,PCR扩增仪,通过在90-95℃变性,形成单链,然后退火降温到40-60℃,
在引物及其他辅助因子的作用下,使其初步结合,再快速升温至70-75℃,荧光定量pcr仪价格,在相关酶的催化作用下,合成双链。完成一个扩增循环。
由此我们也可以得出PCR仪的一个主要参数:温度,温度示值是否准确,pcr仪,升温速率的快慢是影响其的一个主要因素。
具体要加什么缓冲液,要加什么引物,以及其他一些辅助因子,后续我们再去了解。
PCR的反应包括三个主要步骤:分别是1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。 后在DNA聚合酶 e.g. Taq-polymerase 的作用下进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。
PCR的早设想 核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可tRNA基因”。
PCR的实现
1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内,只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件---摸板DNA ,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲体系,DNA变性、复性及延伸的温度与时间。
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