如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？
制备色谱柱为ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为Agilent1100或LC-6A。
想用其制备面积归一化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。
如何设定色谱条件，如，流量、进样量、样品的浓度、切割点的设置、是否要浓缩，要求将95%以上的主峰切除。
（主峰后有二个杂质靠得很近。
）
答：
1.制备用的流动相尽量等级高一点，液相色谱仪批发价格，否则流动相中的杂质会影响LC-MS分析。
2.使用馏分收集器时，液相色谱仪哪个牌子好，延迟体积一定要计算准确，液相色谱仪哪家便宜，检测器的响应时间设到很小，否则都会影响收集的纯度和回收率。
制备柱的流速一般与直径的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速为1mL/min，9.4mm制备柱用1*（9.4/4.6）2，液相色谱仪，大约为4mL/min。
进样量设到几个mg应该基本没有过载。
进样样品浓度越高越好。
假如进样10mg，理论计算0.05%的杂质大约只有5μg，显然浓度太低，尽量是多做几次，合并馏分然后浓缩后做LC-MS分析。
同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？
一般会有一定的变化，原因有以下几点：
（1）制备柱的装填是否均匀，如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样，停留时间不同，色谱峰可能变宽。
（2）如果样品在流动相中溶解度小，在制备色谱上会有不同的峰展宽。
（3）如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象，放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重，导致分离失败。
制备色谱仪分类有多种
1、按流动相物理状态可分：制备型气相色谱仪、制备型液相色谱仪和制备型超临界流体色谱仪。
2、按分离模型可分：制备型线性色谱仪和制备型非线性色谱仪。
3、按分离对象的属性可分：制备型有机色谱仪和制备型无机色谱仪。
4、按固定相物理状态可分：制备型气液色谱仪、制备型气固色谱仪、制备型液液色谱仪和制备型液固色谱仪。
5、按用途可分：制备型生物色谱仪、制备型制药色谱仪、制备型化工色谱仪、制备型食品色谱仪、制备型菌体色谱仪等。
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