感受完这种粗糙度之后,2010年就有人把疏水蛋白引入到检测中,改善这种基质表面抗体堆积不均匀的情况。疏水蛋白能够自组装形成10nm厚的两亲性膜,疏水性一侧贴在疏水性的聚板上,亲水性的一侧伸向溶液中,电固化蛋白,可以物理吸附抗体,蛋白固化原理,用于组装一抗。石英晶体微天平结果显示在pH=5时,聚板上形成一层致密的膜;X射线光电子能谱和水接触角测试显示疏水蛋白修饰后,疏水的聚板能够保持长达3个月的亲水性;原子力显微镜结果显示,连接到疏水蛋白上的抗体也终于站起来了,是一种“end-on”的取向排列。
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与其他芯片制作技术相比较,蛋白固化,微珠芯片具有如下优势:
(1) 密度高微珠芯片的点样密度是原位光合成法的16倍,喷点法的100倍,接触式点样的400倍。
(2)测试重复性好鉴 于超高密度的特点,微珠芯片中每个样品都能保证约30个重复,从而保证测试的高重复性、高重复串以及高可靠性。
(3)定制方便若需要在已完成的芯片中增加测试点或新基因,只要合成相应的微珠加入到微珠混合池中即可。
(四)基因芯片数据分析
基因芯片分析包括五个基本步骤:生物学问题、样品制备、生物化学反应、检测、数据模型分析。基因芯片数据分析包括两部分,数据可靠性分析和生物学意义分析。
2.APES(3-氨丙基-乙氧基)
APES必须现用现配。用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片,蛋白固化作用,否则,组织片中易出现气泡。 APES的使用方法:用50倍稀释(APESl份、49份混合),将洗净的玻片放人稀释好的APES中,停留20~30秒,取出稍停,再人纯或蒸馏水中涮去未结合的APES。置通风橱中晾干即可。注意用APES防脱片处理的载玻片捞片时组织应一步到位.并尽量减少气泡存在,以免影响染色结果。注意不要将APES与其他防脱混合使用。
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