简介:Nucleofector核转染技术
随着系统生物学与交叉学科方法的应用,要求细胞和系统 模型越来越接近体内细胞的功能。这就意味着将来的细胞 转染多数会是原代细胞的转染。而传统的方法很难成功转 染原代细胞。另外即使使用细胞系做为系统模型,传统的 方法也难重复出好的转染效率与成活率。Nucleofector 技术就从根本上解决这个问题。无论是原代细胞、干细胞 还是细胞系,它每次都可重复出很高的转染效率。 1998年,Nucleofector技术开发成功,2001年上市,是市场 上个有效的、非病毒介导的、用于原代细胞与难转染细 胞系的转染方法。现在Lonza还在继续不断改革创新,为研 究者推出更多更好的新产品。
原理:
NucleofectionTM技术是利用电击在细胞膜上穿个小孔。并且 综合优化了各种特定细胞转染程序与转染液,使得转染物质 (如DNA、RNA等)不仅可以进入细胞质,而且可直接通过核 膜进入细胞核。这使得细胞的转染效率高可达99%。
Nucleofector技术的组成:
Nucleofector技术由Nucleofector仪器、细胞转染试剂和操作 手册组成
※ Nucleofector仪器:
1. 模块化设计,各模块可单独配置;
2. 核心模块内置各种细胞优化的电极参数,可直接选择;
3. X模块提供中低通量(1-16样),中低细胞数量(约1e+5 到1e+7)转染;
4. Y模块提供24孔板直接贴壁转染;
5. 96模块提供高通量(96样),低细胞数量(约1e+5)转染;
6. LV模块提供低通量,大量细胞直接转染 (1e+8到1e+9);
※ 试剂盒:包含有转染溶液、添加剂、专用电极杯、吸管、 阳性对照质粒。转染试剂为细胞转染提供保护,即保证了 高的转染效率与成活率,又帮助细胞维持良好的生理功能 性状。我们提供有一系列的优化转染试剂盒与操作手册。
※ 数据库与操作手册:我们的在线数据库提供600种以上细胞 的转染数据和操作手册。优化的操作手册除了操作手册除了 操作指导外,还包括细胞来源、传代、生长条件、培养基以 及转染后培养等细节技巧。
具兼容性的模块:Nucleofector X模块
针对不同数量级的细胞,提供不同的电极杯。
X模块可以使用两种不同形式的聚合材料电极,分别是如下 电极杯和电极板条
100ul电极杯
※ 新式可导电材料的电极杯替代了原来铝制电极杯
※ 低通量但是一次可转较大量的细胞 (适用于生化应用或Western Blot实验)
16孔20ul电极板条
※ 与96孔电极杯的板条一致
※ 中通量,低细胞数量(报告基因分析,RNAi)
可在相同的条件下转不同数量的细胞
X模块使用的相同材质制成的20ul电极板条与100ul电极杯,X模块中不同的电极模式可选用相同的电转程序(系 统可自动转化应用于不同模块的参数,客户无需进行额 外操作),实现实验的方便性与灵活性大化。 一旦其中一种电极形式优化好,另一种就很容易转化好。 不同通量的电转条件也很容易转化。 96孔模块的操作手册也适用于X模块。
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