微生物菌种查询网已收录并更新的国内外菌种资源达12万余株,其中,国内7万余株,国外4万余枚!网站也对细胞资源信息进行了收录,目前达到了国内
外细胞资源总量超过1万余枚,基本可以满足大部分科研人员的查询需求!我们也罗列了5千余套培养基配方,部分已以文字的形式免费呈现在网站中!而
且我们技术人员已经在对常用质粒载体进行设计构建,并且可提供查询的有400余枚!经过工作人员的不懈努力,网站中的资源信息每天都在增加,信息内容每
天都在丰富,方便了大批需要进行微生物查询的科研技术人员,满足了众多企事业单位及科研院所的需求!
人鳞状细胞癌细胞SNU-46
产品类别:人源细胞系
生长特性:贴壁生长
培养体系:1640+10%FBS
细胞形态:上皮细胞样
一、细胞培养条件
冻存条件无血清冻存液
传代方法次建议1:2传代传代情况2天换液
备注建议购买完培,购买非常优惠
二、细胞收到后处理
培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放
入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(好40x,100x,200x各一张),
前三天照片是重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。(换液后将瓶盖拧松)
三、细胞培养步骤
a、细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;如果细胞密度超80%,
即可进行传代培养,传代具体步骤如下:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿
回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,使之完全脱落后吸出,将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL完全培养基重悬。
4.将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存:
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,将
悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3、弃上清,沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液,混匀后加入冻存管中。
4、将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要将细胞转入液氮罐中,则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏:
1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2、将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3、弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4、第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项:有些细胞贴壁不牢,在运输过程中容易发生细胞脱落,这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管,1000rpm离心5min
,收集上清作过渡培养(后期对比培养),沉淀加入胰酶1-2ml,轻轻吹打,重悬,消化1-2分钟后,加5ml完全培养基终止反应。再离心,弃上清,加1-2ml完全
培养基重悬。按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
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