GE通用电气 IC200UEC008 数字模块
IC200MDL743
IC200MDL750
IC200CBL655
IC200CHS001
IC200CBL602
IC200CHS015
IC200CBL635
IC200CBL615
IC200UAL006
IC200MDL742
IC200UDD040
IC200MDL740
IC200CHS002
IC200CBL555
IC200CBL605
IC200UDD110
IC200MDL730
IC200CBL600
IC200CBL510
IC200CBL545
IC200CBL550
IC200UAR028
IC200CBL525
IC200MDL741
IC200UAL005
IC200CBL520
IC200MDL650
IC200UAA007
IC200MDL643
IC200CBL601
IC200CBL500
IC200CHS012
IC200CBL230
IC200CBL501
IC200CBL120
IC200UAL004
IC200UAA003
IC200MDL636
IC200MDL331
IC200CBL002
IC200TBX520
IC200CBL105
IC200BEM103
IC200CBL110
IC200CBL001
IC200TBX440
IC200UAR014
IC200MDL632
IC200MDL329
IC200MDL244
IC200BEM003
IC200MDL635
IC200MDL243
IC200MDL330
IC200ALG432
IC200TBX364
IC200MDL241
IC200TBX464
IC200TBX223
IC200BEM002
IC200ALG630
IC200TBX264
IC200UDR020
IC200BEM104
IC200TBX240
IC200MDL240
IC200TBX540
IC200TBX214
IC200MDL640
IC200ALG431
IC200ALG430
IC200TBX228
IC200TBX420
IC200TBX340
IC200ALG620
IC200ALG325
IC200MDL144
IC200ALG328
IC200TBX320
IC200MDL143
IC200ALG326
IC200MDL141
IC200TBX164
IC200MDL744
IC200TBX140
IC200TBX123
IC200MDL140
IC200MDD849
IC200PWR001
IC200TBX210
IC200MDD850
IC200UEX064
IC200UEX015
IC200MDD848
IC200UEX014
IC200ALG331
IC200ALG266
IC200TBX110
IC200ALG320
IC200TBX028
IC200TBX128
IC200TBX064
IC200MDD847
IC200MDD845
IC200TBX220
IC200MDL631
1756-A10
1756-A13
1756-A17
1756-A4
1756-A7
1756-BA1
1756-BA2
1756-BATA
1756-BATM
1756-CFM
1756-CN2
1756-CN2R
1756-CNB
1756-CNBR
1756-CP3
1756-CPR2
1756-DH485
1756-DHRIO
1756-DNB
1756-EN2F
1756-EN2T
1756-ENBT
1756-EWEB
1756-HSC
1756-HYD02
1756-IA16
1756-IA16I
1756-IA32
1756-IA8D
1756-IB16
1756-IB16D
1756-IB16I
1756-IB32
1756-IC16
1756-IF16
1756-IF16H
1756-IF6I
1756-IF8
1756-IF8H
1756-IG16
1756-IH16I
1756-IM16I
1756-IR6I
1756-IT6I
1756-L71
1756-OF8
1756-EN2TR
1756-L72
1734-OB8
1734-IB8
1734-OB8S
下面笔者将以 Qubit®dsDNA BR Assay Kit 在 Synergy Neo2 上的应用为例,为大家介绍使用 Synergy 系列多功能微孔板检测仪制作标准曲线并测定 DNA 浓度的方法。
材料:
·Qubit®dsDNA BR Assay Kit (Invitrogen,# Q32850)
·纯化的鲱鱼精子 DNA (Sigma-Aldrich, # D6898),于 TE 缓冲液中保存
·TE 缓冲液 (10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8.0).
·96 孔黑色平底聚苯乙烯微孔板(Corning, #3915)
·量程为 10 -200μL 的移液器
·GFP 滤光片 Cube(PN 1035108 EX 485/20 EM 530/25,DM 510)
·
方法:
·用缓冲液将 200× 浓缩液稀释 200 倍。
·为适配试剂本身的分析范围,将 TE 缓冲液中的 2.2 mg/mL 鲱鱼精子 DNA 溶液梯度稀释成 4 个梯度:0.1 、1 、10 和1000 ng/µL 。
·用移液器将样品和 10 µL DNA 标准品添加到 96 孔板中,然后添加适量的工作液使*终体积为 200µL ,室温孵育 5 分钟后上机检测。
程序设定:
1. 在孔板类型下拉菜单中选择“96-well plate”
2. 在检测方法界面依次选择“荧光强度”-“终点/动力学”-“滤光片”
3. 在检测步骤界面设置好标签,选择单 PMT 顶部检测,下拉选择“485/528”滤光片组,增益设置为 50
板布局:
设置标准品、本底和样品位置,并根据配置的标准品浓度进行标注
数据处理:
1. 本底扣除
2. 标准品曲线设置:将 X 轴设置为浓度,Y 轴为扣除本底的 528nm 处荧光值,曲线拟合选择四参数非线性回归,并将轴演示都设置为对数
结果:
在 Gen5™ 中绘制四参数非线性拟合的标准曲线,显示相关性良好
上述实验表明,Synergy Neo2 可以提供有效的高通量核酸荧光定量方法。
除此之外,Synergy 系列多功能微孔板检测仪提供三种震板模式和恒温孵育功能,实验者可预先设置程序,在完成加样后直接将 96 孔板放入检测仪中进行混匀和避光孵育,无需繁复操作,直接检测。Synergy Neo2 在检测速度和灵敏度上具有无可比拟的巨大优势:可以在 6 秒内完成 96 孔板的荧光强度检测;当使用 384 孔板检测时,顶部检测模块荧光检测灵敏度高达 0.2 pM 。
荧光染料法可以测定单种核酸的浓度却无法鉴定样品纯度,但在实际操作中,样品的纯度也是保证实验结果可靠的重要因素。核酸纯度通常由紫外分光光度法得到,主要以核酸在 260nm 和 280nm 处吸光度的比值衡量。
Synergy 系列多功能微孔板检测仪不仅支持荧光强度的检测,还提供全波长吸收光检测和发光检测。搭配 Take3 或 Take3 Trio 微量核酸浓度检测板和 Gen5™ 预设程序,可在一次运行中测定 16 或 48 个样品,实现高通量紫外吸收光核酸定量,大大提高检测效率。拥有一台仪器即可完成高质量微量核酸浓度和纯度测定,为核酸浓度测定提供真正的高通量解决方案。
高通量解决方案
Agilent BioTek Synergy 系列多功能微孔板检测仪,可实现全波长吸收光、荧光和化学发光检测。独特的 Hybrid 技术可为多种应用提供出色的灵敏度和灵活性:四光栅系统支持全波长荧光检测,波长灵活选择,带宽连续可调(Synergy H1 为 9 ~ 50 nm,Synergy Neo2 为 3 ~ 50 nm ),能够更好地兼顾荧光探针的特异性和灵敏度;滤光片系统搭载灵敏的高透射滤光片,支持均相时间分辨荧光(HTRF)、荧光偏振(FP)等**荧光检测。二者光路独立,可确保在所有检测模式下具有出色的性能。
BioTek Synergy Neo2 应用范围极广,适用于各类药物筛选、分子相互作用、细胞代谢、细胞因子检测等方向,涵盖细胞、分子、药物等多个领域的实验需求。此外,Synergy Neo2 可装配用于 ALPHA 和 TRF 检测的激光器,有效提高灵敏度和读取速度。4 个 PMT 提供超快测量速度,顶部双 PMT 模块可同时进行两次测量,能同时采集两个发射信号,有效地将测量速度提高一倍,可以一次性获得 FP 、FRET 和 TR-FRET 测量结果,节省实验时间。同时,四区温控技术提供稳定温度控制,外接气控模块控制舱内 O2与 CO2浓度,为活细胞的长期检测提供了适宜的环境条件。