| 类型 : | 其他生物化工 |
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF
（Strep-Tactin Berpharose FF）
1. 产品介绍
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF是一种将Strep-Tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质，主要用于纯化Strep II标签蛋白。
Strep II标签为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为1kDa左右，一般不影响融合后蛋白质的结构和功能，常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。
本产品的配基Strep-Tactin是链霉亲和素（Streptavidin）的突变体，与链霉亲和素相比，Strep-Tactin对Strep II标签的亲和能力至少强10倍以上，能够在温和的条件下与Strep II融合蛋白结合和解离。
由于Strep-Tacin对Strep II标签具有高度特异性，一般一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。
Strep II标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱，该洗脱方式比较温和，一般不会影响蛋白质的性质。
如蛋白质能耐受一定的碱，也可用碱液洗脱，比如10mM NaOH等。
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF能耐受较高的碱清洗，可以用0.5M NaOH进行再生清洗和去除热源等。
另外，2-(4-羟基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用于凝胶再生，过量的HABA能够竞争下脱硫生物素，并且在无HABA的缓冲液中，能将凝胶上的HABA洗脱。
2.规格
1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、20ml、100ml、500ml
3.产品性能
性能 | 指标 |
基质 | 6%琼脂糖微球 |
配基 | Strep-Tactin |
配基密度 | ≥5mg/ml |
载量 | ≥6mg/ml Strep II标签蛋白 |
粒径 | 45-165μm |
推荐流速/最大流速 | 20-100/700 cm/h |
耐反压 | 0.3MPa |
pH稳定范围:短时间/长时间 | 2~13/4~11 |
储存缓冲液 | 20%乙醇 |
储存温度 | 4-8℃ |
4.纯化流程
①推荐缓冲液
纯化Strep II标签蛋白
结合缓冲液：100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0；
或20mM NaH2PO4，280mM NaCl，6mM KCl，pH7.4
洗脱缓冲液：结合缓冲液+ 2.5mM脱硫生物素；或10mM NaOH
再生缓冲液：0.5M NaOH；
或结合缓冲液+1mM HABA
②样品准备
上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。
通常可用透析、超滤、稀释等方法处
理样品。
并且上柱前应过0.45μm滤膜或高速离心去除不溶物。
③样品纯化
（1）平衡：取适量的Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用蒸馏
水清洗5个柱体积去除保存液，再用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100cm/h。
（2）上样：将准备好的样品上柱，建议流速为20-100cm/h，可根据实际结合情
况选择流速，能获得较好的效果。
（3）再平衡：上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上，或平衡至基线，洗去
杂质，推荐流速为100cm/h。
（4）洗脱：用洗脱缓冲液洗10-20个柱体积，建议流速为100cm/h，收集的洗脱
液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。
（5）NaOH再生：洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3-5个柱体积，并用0.5M
NaOH再生3-5个柱体积，再用蒸馏水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。
（6）HABA再生：用脱硫生物素洗脱目的蛋白的，还可以用HABA缓冲液再生，
一般用HABA的结合缓冲液洗15个柱体积，再用结合缓冲液洗30个柱体积，然后可以用20%乙醇保存柱子，或进行下一步纯化。
HABA