| 类型 : | 其他生物化工 |
NHS活化琼脂糖凝胶FF
（NHS activated-Berpharose FF）
1.产品介绍
NHS-琼脂糖凝胶FF是一种将琼脂糖凝胶微球用NHS活化形成的生物亲和层析
分离介质。
该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，同生物活性大分子有很好的相容性，具有载量高、非特异性吸附少和流速快等特点。
本活化的琼脂糖凝胶能温和地同氨基基团反应，特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶和核酸等功能性生物大分子。
2.规格
10ml、100ml、500ml、1L
3.产品性能
性能 | 指标 |
基质 | 6%琼脂糖微球 |
配体 | NHS |
配体密度 | 25μmol/ml |
载量 | ≥10mg目的蛋白/ml |
粒径 | 45~165μm |
推荐流速/最大流速 | 50~100/700 cm/h |
耐反压 | 0.3MPa |
工作温度 | 4~40℃ |
pH稳定范围:长时间/短时间 | 3~12/2~14 |
储存缓冲液 | 异丙醇 |
储存温度 | -20℃ |
有效期 | 1年 |
4.使用方法
应用举例：
NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗体
①配制抗体：取100 mg IgG用10 ml偶联缓冲液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl，pH8.3）溶解。
②偶联反应：取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF，用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液，之后立即加入到抗体偶联溶液中，4℃振荡偶联6 h或者偶联过夜。
③封闭：上述溶液过滤，用50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶，用10 ml封闭缓冲液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl，0.5 M乙醇胺，pH8.3）于室温振荡4 h（或者过夜）以封闭未偶联的基团，之后用20 ml蒸馏水清洗干净即可。
④检测：用SDS-PAGE检测偶联前后的反应液并计算偶联效率，偶联好的填料根基特性测定功能和载量。
5.注意事项：
1)偶联缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但不能使用氨基缓冲体系（如Tris-HCl缓冲液）。
2)稳定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3，可适当提高偶联温度（如室温）将偶联时间缩短至1~2 h。
3)如对配基的稳定性不够了解，可以选择不同pH值缓冲液和不同温度，用0.5~1 ml配基相应浓度的溶液，在无填料的条件下模拟偶联反应，观察溶液是否会产生沉淀。
有沉淀产生说明偶联效果不佳，可适当降低缓冲液pH值或温度。
同时可以添加约5%的甘油或PEG保护蛋白，避免产生沉淀。
4)根据偶联蛋白的稳定性选择合适的偶联pH值和温度。
偶联较适pH值为pH7.5~9.0，室温或4℃均可。
提高偶联温度能够提高配基的偶联效率。
5)偶联蛋白溶液的浓度以5~15 mg/ml为佳。
偶联凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5~1:2.0为佳。
6)如果偶联的配基不稳定，可于4℃振荡偶联1~12 h以维持配基的活性。
偶联配基后应尽快清洗填料，避免配基在高pH条件下失活。
7)封闭缓冲液一般使用带氨基的小分子试剂，如乙醇胺、Tris等。
于pH8~9、室温条件下封闭数小时可完全封闭。
推荐封闭缓冲液：0.5 M乙醇胺，0.5 M NaCl，pH8.3或0.1 M Tris-HCl，pH8.5。
8)偶联中尽量使用温和的混匀方式，如振荡、翻转和旋转等，如使用磁力搅拌器或者机械搅拌，需要降低搅拌速度，使填料能够混匀完全悬浮即可，避免剧烈搅拌导致凝胶微球破碎。
9)NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用，避免取出后放置时间过长导致活性降低。
10)仅供科研实验使用