免l疫印迹和检测（所有步骤均在室温下搅拌）
1.在电印迹步骤之后，将PVDF膜浸入100％甲l醇中15秒钟，然后使其在室温下干燥5分钟。注意：如果使用硝l酸纤维素代替PVDF，则应跳过此步骤。
2.在室温下不断搅拌下，在TBST中用5％脱脂奶粉或3％BSA封闭膜1小时。
将膜与抗Arf 6兔多克l隆抗l体在5％脱脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：50?1000（取决于样品中Arf 6蛋白质的量）新鲜稀释，孵育1-在室温下持续搅拌2小时或过夜4oC。
3.用TBST将印迹的膜清洗3次，每次5分钟。
4.将膜与二抗（例如山羊抗兔IgG，HRP偶联物）一起孵育，在室温下以恒定的比例在5％脱脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：1000的比例新鲜稀释。搅动。
5.用TBST将印迹的膜清洗3次，每次5分钟。
6.使用您选择的检测方法，例如ECL。
武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往全球。
所需但未提供的材料 1.刺激的和非刺激的细胞裂解液 2.蛋白酶抑制l剂 3. 4°C管摇杆或摇床 4. 0.5 M EDTA，pH8.0 5. 1 M氯化镁 6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液 7.电泳和免l疫印迹系统 8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，Gaz-GTP，0.15 M NaCl，0.05％ 吐温20） 9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA） 10. PVDF或硝l酸纤维素膜 11.二抗 12. ECL检测试剂 试剂准备 ?1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 就在 用法中，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。
储存条件
试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°C条件下保存。
试剂（试剂盒内不提供，由实验者自行配置）
1. 刺激和未刺激的细胞裂解物；
2. 蛋白酶抑制l剂；
3. 4 °C 摇杆或者摇床；
4. 0.5 M EDTA (pH 8.0)；
5. 1 M MgCl2；
6. 2X reducing SDS-PAGE sample buffer；
7. 电泳和免l疫印迹相关试剂；
8. 免l疫印迹缓冲液TBST (10 mM Tris-HCl， pH 7.4， 0.15 M NaCl， 0.05%
Tween-20)；
9. 免l疫印迹封闭缓冲液 (TBST containing 5% 脱脂奶粉 or 3% BSA)；
10. PVDF或硝l酸纤维素膜；
11. 二抗；
12. ECL 检测试剂；
Gaz-GTP-纽斯特生物技术公司由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉纽斯特生物技术有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，与您一起飞跃，共同成功!
