智立中特(武汉)生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用,围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求,探索、发现、收集国内外的微生物资源,妥善长期保存管理;在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的型网站,由智立中特(武汉)生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造!主要展示了各种基因类型下的质粒载体!
我们的工作主要包括:广泛分离、收集、保藏、交换和供应各类微生物质粒菌种;保存用于专利程序的各种可培养生物材料;质粒载体类保藏技术研究;微生物分离、培养技术研究;微生物鉴定和复核技术研究;保藏菌种的资料情报收集和提供及编辑微生物菌种目录。
种属人
年龄(性别)男
组织来源唾液腺腺样囊性癌
生长特性贴壁
细胞形态上皮细胞样
背景描述Acc-3细胞源自一位49岁男性的腺样囊性癌;Acc-3细胞能表达角蛋白。
生长培养基DMEM高糖+10%FBS+1%P/S
培养条件气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
准备DMEM/F12培养基;优质胎牛血清,10%;400ng/mL氢化可的松,双抗,1%。
1)注意事项:
(a)在细胞生长的初始阶段,细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。随着培养时间的增加,细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度,会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中,镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。
(b)该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时,用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落,收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。
(c)该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时,细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起,有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的,在传代时应收集起来,离心后细胞沉淀可以继续培养。
(d)血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化,应选用高质量的胎牛血清。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达70%-90%,即可进行传代培养。
该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞,传代可以参考以下方法:该细胞用细胞刮铲替代胰酶来对细胞进行处理。用无菌细胞刮铲刮拭细胞附着培养表面将细胞刮落,收集细胞后离心去上清,重悬后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内。收货后次传代1:2进行,后续可以根据实际的情况以1:2~1:4的比例进行传代。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。