关于细胞冻存的注意事项：
1. 为保持细胞大存活率，一般都采用慢冻存融的方法。
2. 冻存物距液氮面越近温度越低。标准的低冻速度为－1℃~12℃/ 分钟，当温度下降达－25℃时，下降速度可增至－5~－10℃/ 分钟，到－100℃时则可迅速冻入液氮中。因此要适当掌握冻存物下降入液氮中的速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促冰晶形成。
3. 初次冻存者在下降冻存时，宜先用细木棒伸入罐中探测液面位置，然后需用温度计与冻存物并行的办法，以观测下降冻存物的速度、冻存物与液氮液面距离和温度三者关系，当已掌握以上各参数和冻存技术熟练后，仅按下降时间和下降距离便可获理想冻存效果。
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°C下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:消化液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无Ca2 、Mg2 的Hank"s液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存，用前可在379C下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui终浓度达0.02%。
2、快速脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]：
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时，使其达到 50～60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 DNA/脂质体复合物方法如下：
①在 1 mL 无 DMEM 中稀释 PSV2-neo 质粒 DNA 或供体 DNA。
②旋转 1 秒钟，细胞实验，再加入脂质体悬液，旋转。
③室温下放置 5～10 分钟，使 DNA 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液，用 1 mL 无 DMEM 洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入 1 mL DNA/脂质体复合物，37℃ 培养 3～5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20�S 的 DMEM，继续培养 14～24 小时，细胞实验外包，
(5) 吸出 DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜 10�S 的 DMEM，2 mL/孔，再培养 24～48 小时。
(6) 用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下：
(1) 接种细胞同前，细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 mL、20�S 的 DMEM，细胞实验外包哪家好，37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 DMEM，用 G418 选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。
细胞实验外包-细胞实验-英瀚斯生物科技公司由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司为客户提供“组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型科研外包服务”等业务，公司拥有“英瀚斯”等品牌，专注于技术合作等行业。，在江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：戴经理。
