检测技术服务:Edman降解的设计方法

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关键词:Edman降解的设计方法,Edman法测定氨基酸序列实验,蛋白质组学,代谢组学,tmt,抗体测序,itraq,蛋白质谱鉴定,蛋白质组学,代谢组学,tmt,抗体测序,itraq,蛋白质谱鉴定

Edman降解(Edman degradation)是鉴定蛋白质一级结构的化学方法,是测定蛋白质、多肽或者氨基酸残基序列的一种技术。

通过预先完善Edman降解的设计方法可在一定程度上提升蛋白测序试验的成功率,是蛋白质测序过程中一个非常重要的步骤。Edman降解的具体设计方法主要分为以下几个部分。

蛋白质裂解过程:由于Edman降解法不能对超过60个氨基酸的肽段进行测序分析,因此,对于长肽段的测序,需要将长肽段裂解为氨基酸个数在Edman降解的测序范围内的短肽段。裂解过程可使用内肽酶(如胰蛋白酶或胃蛋白酶)或者化学试剂(如溴化氰)进行。之后依次对短肽段进行测序,通过片段间的重叠拼接整体蛋白质的序列信息。

Edman反应过程:可将待测序的蛋白质吸附到固体表面上,常见的一种固体基材是涂有聚丁二烯(一种阳离子聚合物)的玻璃纤维。将Edman试剂苯基异硫氰酸酯(PITC)与弱碱性缓冲溶液(pH=8.0-9.0,如12%三jiǎ胺)一起添加到吸附的蛋白质中,与氨基酸N端的α游离氨基进行反应,形成末端残基的苯硫代氨基甲酰基(PTC)衍生物,即PTC-肽。

加酸裂解:即添加无水酸(如三氟乙酸)来选择性的分离N末端氨基酸,此时PTC衍生物发生异构化生成替代物苯基硫代乙内酰脲,通过洗脱替代物并进行色谱鉴定即可对得到的氨基酸残基进行检测。

蛋白质鉴定:重复以上化学反应循环,将每个循环中从蛋白质或肽段N末端释放出的氨基酸经过层析或高效液相色谱法(HPLC)检测,即可识别并鉴定所得氨基酸。

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统,可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统,可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先jìn的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台,可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。


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发布时间
2023-12-14 09:15
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