人抗凝血酶(AT) ELISA试剂盒操作流程如下：
1.【平衡试剂盒至常温】：取出实验过程中所需板条，剩余半条用自封袋密封放回4摄氏度。
2.【加样】：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。在样本孔先加样本10μl再加样本稀释液40μl，（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
3.【加酶】：标准品孔和样本孔总每孔加入酶标试剂100μl（辣根过氧化物酶标记的检测抗体）空白孔除外。
4.【温育】：用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱温育60分钟。
5.【配液】：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.【洗涤】：小心揭掉封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置60秒后甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复5次（也可用洗板机洗板）。
7.【显色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光孵育15分钟。
8. 【终止】：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9. 【测定】：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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ELISA操作技术影响：1）加样后及时放入孵箱，标本较多时要分批操作。按照说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围难以清洗。2）显色剂尽量再临用前配制，坚持不用过期的显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。3）加酶试剂后用吸水纸再酶标板表面轻拭吸干。4）合理安排检测量以免反应板过多造成洗板等待时间长。5）严格按照试剂盒说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60min.
