国产的细胞培养瓶一般盖子都是封闭的,不带内垫,常用于密闭培养,可保证其密闭性;进口的培养瓶的盖子样式比较多:密闭盖、聚酯盖、透气盖、隔垫盖等。
密闭盖的性能和国产的是相同的,聚酯盖常用于开放培养,只需轻轻旋松瓶盖便可保证瓶内气体与环境中气体的交换。
透气盖是在瓶盖中加了0.2μm疏水滤膜,提供无菌气体交换,减少污染的风险。
常用于开放培养,推荐用于CO2培养箱培养,尤其适用于需要长期培养的实验。
隔垫盖是在隔垫上带有预切割口,这样可以使吸嘴(或者5ml以下规格的移液管)穿插隔垫进行加液、吸液或者收获细胞,减少污染的机会,维持培养瓶封闭无菌的环境。
细胞在细胞培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。
传代培养也是一种将细胞保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
悬浮性细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
具体操作步骤如下:
将长满细胞的细胞培养瓶中原来的培养液弃去。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。
随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。
观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。
一般室温消化时间约为1—3分钟。
用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。
第二天观察贴壁生长情况。
以上是细胞培养瓶在细胞传代中的应用,消化液的配制方法如下:称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1:250),加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,滤器过滤除菌,4℃保存,用前可在37℃下回温。
胰酶溶液中也可加入EDTA,使终浓度达0.02%。
培养瓶和培养皿的区别
培养瓶适合长期培养、传代、作为种子细胞。
不易污染。
培养皿和培养板适合在各种实验中选用,临时培养。
培养面积T25约为25,T75为75。
6孔板、10/孔。
12孔板4/孔。
培养瓶和培养皿的区别在于,安全系数的高低、培养细胞数量的多少。
个人感觉培养瓶的安全系数更高,操作也比较方便。
培养瓶瓶可以用来做相对大规模的培养或比较容易被污染的细胞。
而培养皿比较适合小规模的培养或做一些对照分析实验。
培养瓶主要分类
按细胞对产品的贴壁要求分为三类:
普通型适合细胞和组织的悬浮培养;
标准型具有良好的细胞贴壁性能,适用于细胞的贴壁生长;
型表面含有含氮官能团,能促进某些细胞(如细胞)的贴壁、生长和分化。
按瓶子外形分为:
宽体培养瓶;
三角培养瓶;
斜颈培养瓶。
细胞培养瓶特征
厚度均匀,底部无畸变;
密封盖/滤膜盖(0.22μm疏水膜);
设计的瓶盖可快速旋转;
侧面可叠放,更有效地利用培养箱;
无毒,无DNA/RAN酶;
伽马射线消毒灭菌。
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