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检测技术服务:Edman降解法测序反应条件
2023-12-14 13:30  浏览:26
检测技术服务:Edman降解法测序反应条件

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Edman降解(Edman degradation)法即在弱碱性条件下使蛋白质肽链N末端游离α残基与异硫氰酸苯酯(PITC)反应,然后用酸处理,从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰硫脲(PTH)衍生物的形态游离出来,然后测序并进行序列分析。

Edman降解法测序是通过一次次循环反应完成的,在每一轮的循环步骤中都包含偶联、裂解、转化以及氨基酸识别过程,其反应条件如下所示:

偶联条件:以气态形式输送12%三甲基胺水溶液(pH=8.0-9.0),输送含有异硫氰酸苯酯(PITC)的正庚烷溶液并重复碱溶液的输送。45-48℃进行偶联化学反应,惰性气体干燥并使用正庚烷和乙酸乙酯分析纯溶液洗涤。

裂解条件:输送几微升的无水三氟乙酸(TFA)并在45-48℃进行裂解,之后用惰性气流干燥除酸。输送丁基氯以溶解释放的苯胺唑啉酮(ATZ)氨基酸,ATZ氨基酸丁基氯混合溶液输送入转化器,并重复使用丁基氯溶剂抽提。

转化条件:输送25%-40%无水三氟乙酸(TFA)水浴液(转化介质R4)至转化器,45-50℃转化10-20分钟。苯异硫尿氨基酸(PTH氨基酸)溶解于一种合适的溶剂混合物,如20%乙腈水溶液含或不含乙酸钠添加剂以调节pH;这样可直接注入高效液相色谱(HPLC)系统的HPLC色谱柱上柱。

序列分析:运行空白循环,运行PTH-氨基酸并校准,将每个循环切割下来的氨基酸于PTH-氨基酸进行比较并与前后循环反应后的氨基酸进行对比,zuì终确定蛋白质肽链N-末端氨基酸序列。

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统,可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统,可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先jìn的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台,可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。


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