转印电泳的一抗和二抗
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一抗孵育：将LG用稀释液稀释到适当的浓，在摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，电泳槽，可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间）
洗膜：用PBST或者TBST洗膜5 X 5min，小型蛋白电泳槽，如果预实验中发现背景过高，可以增加洗膜时间或洗膜次数
二抗孵育：二抗是辣根过氧化物酶(HRP)标记的LG， 摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可适当降低延长二抗孵育时间）
洗膜：用PBST或者TBST洗膜3 X 10min
T：Tween-20（去污剂）
SDS-PAGE电泳
蛋白质在SDS-PAGE电泳中，迁移率只和其分子量相关
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PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。不连续的凝胶作为支持介质，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，电泳槽，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。
电泳槽内无电流（铂金电极上无气泡）
1、首先利用万用表检查电泳电源有无输出电压（注意选择直流电压挡，输出不得超过量程，以免损坏万用表）。
2、利用万用表电阻挡检查电泳槽导线是否导通。
3、利用万用表电阻挡检查电泳槽电极头与铂金丝之间是否导通，重点检查电极头是否与连接铂金丝的焊片紧密连接，如发现松动请使用尖嘴钳将其紧固即可，完毕后再进行检测，若还没有电流通过则检查铂金丝是否断裂，若铂金丝有断裂迹象则需要和生产厂家的售后服务部门联系，由厂家负责处理，一般需要对铂金丝进行更换处理。
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