核酸电泳的原理
1.核酸分子中糖-磷酸骨架中的磷酸基团,呈负离子化状态;核酸分子在一定的电场强度的电场中,他们会向正电极方向迁移;
2.电泳中使用无反应活性的稳定的支持介质,电泳迁移率(或迁移速度)与分子大小、介质粘度等成反比;
因此,可在同一凝胶中、一定电场强度下分离出不用分子量大小或相同分子量但结构型有差异的核酸分子。
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蛋白电泳
蛋白电泳样品的浓缩效应
1:凝胶孔径的不连续性:
浓缩胶为大孔胶;分离胶为小孔胶。在电场作用下,样品颗粒在
大孔胶中泳动的阻力小,移动速度快;当进入小孔胶时,受到的阻
力大,移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处,样品迁移受阻而压
缩成很窄的区带。
2: 电位梯度的不连续性:
电泳开始后,快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低 的低电导区,小型蛋白电泳槽生产厂家,使局部电位梯度增加,北京小型蛋白电泳槽,将蛋白质浓缩成狭窄的区带
大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷,在电场中,都向正极移动。以上内容由北京龙方科技为您提供,希望对朋友们有所帮助!
DNA电泳常见问题分析及解决方案
DNA条带模糊:1,DNA降解避免核酸酶污染;2,小型蛋白电泳槽批发,电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液;3,所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,小型蛋白电泳槽供应商,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力;4, DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量;5,DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐;6,有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白;7,DNA变性电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA条带迁移:1, 对于λ/Hind III片段cos位点复性电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟;2,电泳条件不合适电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液;3,DNA变性以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
带弱或无DNA条带:1,DNA的上样量不够增加DNA的上样量;聚酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低;2, DNA降解避免DNA的核酸酶污染;3,DNA走出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;4,对于EB染色的DNA,所用光源不合适应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失:1,小DNA带走出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;2,分子大小相近的DNA带不易分辨增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度;3, DNA 变性电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA;4,DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析
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