武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往全球。
所需但未提供的材料 1.刺激的和非刺激的细胞裂解液 2.蛋白酶抑制l剂 3. 4°C管摇杆或摇床 4. 0.5 M EDTA，pH8.0 5. 1 M氯化镁 6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液 7.电泳和免l疫印迹系统 8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％ 吐温20） 9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA） 10. PVDF或硝l酸纤维素膜 11.二抗 12. ECL检测试剂 试剂准备 ?1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 就在 用法中，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。
1.抗活性的Arl1，小鼠单克l隆抗l体（货号26924）：一小瓶–溶于pH 7.4的PBS中的22 μL（1mg / ml），含有50％甘油和0.05％叠氮l化钠。该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arl1-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μL 50％浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液（目录号30302）：一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl，pH 8，750mM NaCl，50 mM MgCl2，5 mM EDTA，5％Triton X-100。
4.抗Arl1，小鼠单克l隆抗l体（目录号26056）：一小瓶– 100 μL（1 mg / ml）
pH 7.4的PBS中含有50％的甘油。
5. 100 XGTPγS（货号30303）：1瓶– 100 μl，10 mM，使用5 μLGTPγSGTP标记的0.5 mL细胞裂解物。
6. 100 X GDP（产品目录号30304）：一个样品瓶– 100 μl，100 mM，使用5 μL GDP
GDP标记的0.5 mL细胞裂解物。
1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑制l剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA，Arf6-GTP，pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％Tween-20）
9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA）
10. PVDF或硝l酸纤维素膜
11.二抗
12. ECL检测试剂
?1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 在使用前，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Cdc42被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2. 每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3. 一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。
4. 将离心管置于30°C条件下反应30min并不断搅动。
5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
Arf6-GTP-纽斯特生物技术公司由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉纽斯特生物技术有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，与您一起飞跃，共同成功!
