细胞实验外包 英瀚斯 南京细胞实验

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杂交瘤细胞基因测序

杂交瘤细胞有丢失高特异性高活性的风险,或者细胞状态不好乃至。而经过杂交瘤测序,细胞实验外包选哪家,可以获得相应的序列,可以以重组蛋白的方式来稳定获得;从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该,而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。同时还可以使用获得的测序结果进行等知识产权方面的申请审批。有时为了进一步大规模生产或进行人源化等生物工程操作/修饰,有必要了解杂交瘤所表达的对应的基因序列以进一步进行生物工程操作与生产。

相较于直接对进行基于蛋白质分析的测序相比,得益于基因测序技术的发展,杂交瘤测序可以提供的结果,防止蛋白测序中如亮氨酸/异亮氨酸较难区分等潜在风险。






透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边.集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。


结果评判:调亡细胞体积变小,细胞质浓缩。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象( cavitati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生调亡小体。









细胞实验介绍——慢病毒建立稳转细胞系

慢病毒包装:公司使用3质粒慢病毒包装系统,慢病毒系统使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G,南京细胞实验,过表达慢病毒系统使用pLVX-AcGFP、psPAX2、pMD2.G三质粒系统,将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中,培养48h后,收集上清。使用genecopo公司慢病毒颗粒纯化试剂盒将慢病毒纯化。纯化后留取部分检测病毒滴度,其余病毒冻存于-80℃冰箱中。

滴度检测:将病毒颗粒使用梯度稀释,分别293T细胞,72h后,在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算病毒滴度。

细胞:在病毒前一天对细胞进行计数,接种约10000个细胞于12孔板中,培养过夜后使用无培养基稀释病毒,加入12孔板中对细胞进行,病毒数量根据推荐细胞的MOI加入(若无推荐MOI,细胞实验外包,需做病毒梯度:1,5,10,50,100 5个梯度对细胞),6h后去除含病毒溶液,加入完全培养基细胞培养,培养48h后,在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选,筛选约2周时间。细胞筛选好后,使用定量PCR和Western blot检测目的基因的稳定表达情况。

实验流程:慢病毒质粒构建-HEK293T细胞培养-质粒转染293T细胞-病毒收集-病毒纯化-病毒滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定

结果示例:





                                               图 A 病毒滴度检测;B 目的细胞病毒效果图


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发布时间
2022-10-29 18:16
所属行业
化工项目合作
编号
30700775
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