脊髓灰质炎病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
使用说明书(48T/96T)
[脊髓灰质炎病毒包括]
脊髓灰质炎病毒I型、II型、III型、I-III型。
[原理]
本试剂盒采用亲和素-生物素化进口PV抗原预包被板ELISA原理,检测人血清/血浆中存在的脊髓灰质炎病毒IgG抗体。并配以酶标记抗人IgG单克隆抗体作为标记物。加入底物TMB显色后终止反应,在450nm波长测各孔OD值,OD值的大小与待检抗体含量成正比。生物素系统(biotin-avidin system)的稳固级联放大作用,使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高是本试剂含有的独特优点。
[用途]
本试剂盒用于检测人血清/血浆中存在的脊髓灰质炎病毒IgG抗体。
[试剂盒组成]
1、生物素化抗原预包被板 1块(48T/96T)
2、阴、阳性对照 各1瓶(直接使用)
3、标本稀释液
1瓶(11ml/48T;22ml/96T)
4、酶结合物
1瓶(5/12ml,直接使用)
5、30X浓缩洗液
1瓶(10/20ml,加蒸馏水1:30稀释使用)
6、显示剂A、B液 各1瓶(3/5ml)
7、终止液(2M H2SO4) 1瓶(3/5ml)
8、说明书 1份
[操作步骤]
1、将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封后置于板架上。
2、样本稀释:用标本稀释液以1∶101(5ul-500ul)稀释标本。吸取已稀释待检标本100ul于反应孔中,设阴、阳性对照(各100ul/孔)及空白对照一孔(加100ul标本稀释液)轻拍混匀。37℃温育30分钟。
3、将浓缩洗涤液用蒸馏水做30倍稀释。甩去孔内液体,用洗涤液洗板3次并在吸水纸上拍干。
4、加酶结合物:每孔2滴,混匀后置37℃温育30分钟,同上法洗涤3次并拍干。
5、显色:每孔加显色剂A、B各一滴,轻拍混匀(或震荡器混匀)后置37℃10分钟。
[结果判定]
1. 目测:在白色背景下观察各孔显色情况,蓝色者为阳性,无色者为阴性。
2. 酶标仪测定:每孔加终止液一滴,混匀后在450nm下测定各孔O.D值。
① P/N=标本O.D值 / 阴性对照O.D值。
② P/N≥2.1为阳性;
③1.5≤P/N<2.1为可疑标本; P/N<1.5为阴 性。
④ 阴性对照(NC)小于0.10时以0.10计, 大于0.1小于0.21时以实际O.D值计算;若大于0.21时,实验可能出现了较大误差,需重复实验。
⑤ 阳性对照(PC)值通常≥0.4,实验成立,否则需重做。
[注意事项]
1、微孔板须密封防潮,从冷藏环境中取出时,应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用,余者封存置2-8℃。
2、滴加试剂前应将液体翻转数次混匀,滴加时保持瓶身垂直。
3、洗涤时每孔均须加满,防止孔内有游离酶不能洗净。
4、试剂置2-8℃存放,不能冻结,有效期10个月。
5、避免用溶血、混浊或脂血标本。
6、**用新鲜标本,如需保存,可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冻存4周(样本应避光)。