O-糖基化是一种常见的蛋白质翻译后修饰，具有不同的结构和功能。由于其在临床和生物制药领域的重要性，有必要对O-糖蛋白进行全面表征，包括测定聚糖组成、序列和附着位点。O-糖基化位点特异性分析是探索糖蛋白结构-功能关系的关键，基于质谱的方法已被证明是糖基化位点特异性分析的核心技术。
O-糖基化位点鉴定的内容包括两个方面，一是鉴定发生糖基化的氨基酸种类，是苏氨酸还是丝氨酸；二是鉴定该氨基酸在肽链中所处的位置。利用质谱技术鉴定O-糖基化修饰位点的大致步骤包括（1）酶解消化O-糖蛋白；（2）O-糖基化多肽的分离和富集；（3）O-糖链的游离释放以及（4）糖肽与糖链分子质量质谱检测。
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