NewEast Biosciences Arf6激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆抗l体和Arf6特异性兔多克l隆抗l体,该抗l体特异性识别Arf6-GTP,但不能识别Arf6-GDP。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力,可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果,并具有一致的可重复性。
Arl1激l活试验。纯化的GST标记的Arl1蛋白用抗活性Arl1单克l隆抗l体(Cat。#26924)用GDP(车道1)或GTPγS(车道2)处理后,用抗Arl1单克l隆抗l体(Cat)进行印迹。#26056年)。显示Arl1蛋白输入控制在底部面板中。
产品描述 Arf样蛋白1(Arl1)是调节性gtpase家族中的一员,位于Ras中GTPases的超家族,在真核生物中具有高度保守的同源基因。Arl1至关重要用于果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育。Arl1在一级序列,细胞位置和功能(膜交通的调节)到Arf1–6甚至共享几个共同的有约束力的合作伙伴。除了在膜交通中的作用高尔基/跨高尔基网络,有报道表明Arl1可能在离子稳态中起作用酵母。 目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP,但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于单克l隆抗l体对其抗原,活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠,重现性一致。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。
悬浮细胞
1.培养细胞并根据需要用活化剂或抑制l剂刺激。
2.进行细胞计数,然后通过离心沉淀细胞。
3.吸出培养基,并用冰冷的PBS洗涤两次。
4.完全除去PBS洗涤液,然后向细胞沉淀中加入冰冷的1X分析/裂解缓冲液
(每1 x 107池0.5 – 1 mL)。
5.通过重复移液裂解细胞。
6.将裂解物转移至适当大小的试管中,IP-WB活性检测试剂盒,并置于冰上。
7.如果发生核裂解,则细胞裂解液可能变得非常粘稠,难以移液。如果这
发生时,裂解液可通过27?号注射l器针头3-4次以剪切
基因组DNA。
8.通过离心10分钟(在4°C下为12,000 x g)清除裂解物。
9.收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用,或速冻并保存在-
70°C以备将来使用。
阳性和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量
注意:体内刺激细胞会激l活大约10%的可用Rab35,而
体外GTPγS蛋白负载将激l活近90%的Rab35。
1.将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Rab35蛋白)。
2.向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(至20 mM终浓度)。
3.将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。
4.在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。
5.在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。
6.通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM)。
IP-WB活性检测试剂盒-纽斯特生物技术由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。“G蛋白活性,cAMP和cGMP ELISA试剂盒,蛋白点突变”就选武汉纽斯特生物技术有限公司,公司位于:湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城B3-3栋3楼,多年来,武汉纽斯特坚持为客户提供好的服务,联系人:乐经理。欢迎广大新老客户来电,来函,亲临指导,洽谈业务。武汉纽斯特期待成为您的长期合作伙伴!