G蛋白活性检测试剂盒 武汉纽斯特

G蛋白活性检测试剂盒 武汉纽斯特

发布商家
武汉纽斯特生物技术有限公司
联系人
乐经理(先生)
电话
027-87561033
手机
18064125815










电泳和转移

1向聚丙l烯酰胺凝胶(17%)中加入15μL/孔的下拉上清液。而且建议包括预染色MW标准(作为成功转入的指标步骤3)。

2按照制造商的说明进行SDS-PAGE。

3按照制造商的说明,将凝胶蛋白转移到PVDF或硝化纤维膜上说明。

免l疫印迹检测(所有步骤均在室温下搅拌)

1在电印迹步骤之后,将PVDF膜浸入甲l醇中15次

然后在室温下干燥5分钟。

如果使用硝基纤维素,则应跳过此步骤。

2室温下用5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在TBST中封闭1小时

不断地搅动。

用抗Arl1单克l隆抗l体孵育,新鲜稀释1:50~1000

(取决于样品中Arl1蛋白质的含量)5%脱脂奶粉或3%

BSA/TBST,室温下持续搅拌1-2小时或4o

过夜。

3用TBST清洗吸水膜三次,每次5分钟。

4用二级抗l体(例如山羊抗鼠IgG,HRP结合物)培养膜,

在室温下,在5%脱脂奶粉或3%BSA/TBST中新鲜稀释1:1000,1小时

不断地搅动。

5用TBST清洗吸水膜三次,每次5分钟。

6使用您选择的检测方法,如ECL。














阳性对照和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量

注意:体内细胞刺激将激l活可用Arf 6的大约10%,G蛋白活性检测试剂盒,而体外GTPγS蛋白负载将激l活Arf 6的将近90%。

1,将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Arf 6蛋白)。

2,向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(终浓度为20 mM)。

3,将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。

4,在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。

5,在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。

6,通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM,终浓度)来停止加载。





储存条件

试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°C条件下保存。

试剂(试剂盒内不提供,由实验者自行配置)

1.  刺激和未刺激的细胞裂解物;

2.  蛋白酶抑制l剂;

3.  4 °C 摇杆或者摇床;

4.  0.5 M EDTA (pH 8.0);

5.  1 M MgCl2;

6.  2X reducing SDS-PAGE sample buffer;

7.  电泳和免l疫印迹相关试剂;

8.  免l疫印迹缓冲液TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05%

Tween-20);

9.  免l疫印迹封闭缓冲液 (TBST containing 5% 脱脂奶粉 or 3% BSA);

10. PVDF或硝l酸纤维素膜;

11.  二抗;

12.  ECL 检测试剂;


G蛋白活性检测试剂盒-武汉纽斯特由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。武汉纽斯特生物技术有限公司是从事“G蛋白活性,cAMP和cGMP ELISA试剂盒,蛋白点突变”的企业,公司秉承“诚信经营,用心服务”的理念,为您提供高质量的产品和服务。欢迎来电咨询!联系人:乐经理。

人气
134
发布时间
2020-11-26 11:47
所属行业
生物化工
编号
24183046
我公司的其他供应信息
相关检测试剂盒产品
拨打电话 请卖家联系我