T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之间的连接，连接时需要5"磷酸基团和3"羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接，也可以进行RNA分子(zui短8个碱基)的环化连接。
T4 RNA Ligase可以用于RNA和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为5"和3"均磷酸化的形式，此时常用于RNA的3"末端标记。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5"磷酸基团，RNA提供3"羟基时，连接效率较高；当DNA提供3"羟基，RNA提供5"磷酸基团时，连接效率非常低。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之间的连接，但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接，例如5" RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行，但比较困难。
碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物1碱等。而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱磷酸化。碱性磷酸酶是磷酸酶的一种，磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，加A尾试剂盒，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有zui大活力，对来源于细菌中的ALP来说，其zui适pH是8.0，而对来源于牛的ALP则是8.5。
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