O-糖翻译后修饰即O-糖基化修饰，指蛋白质合成翻译过程中在特定氨基酸位点如丝氨酸和苏氨酸残基的羧基共价结合O-聚糖的过程。因此，进行O糖基化修饰鉴定的内容就包括结合O-聚糖的氨基酸残基类型以及其在蛋白质肽链中所处的位置、O-聚糖糖链的结构以及含量等。
对于已知的发生了O-糖基化翻译后修饰的蛋白质，其结合的糖链以及可能结合的氨基酸种类是确定的，此时，只需要确定其结合的氨基酸到底是丝氨酸还是苏氨酸，以及该氨基酸在肽链中所处的位置。由于结合了O-糖链的氨基酸比没有连接O-糖链的氨基酸在分子质量上存在特定的差异，质谱技术能检测这种分子质量差异从而实现氨基酸种类的鉴定。通过拼接各肽段可以得到整条蛋白质的氨基酸序列，zuì终确定连接O-糖链的氨基酸位点。
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